چکیده: آنزیم DNA پلیمر از مقاوم به حرارت به علت کاربرد آن در PCR و بیولوژی مولکولی توجه زیاد شده. هدف سنجش عملکرد تولید آنزیم DNA حساس به سرما و مقاوم به حرارت است. در باکتری و خالص سازی سریع و ارزان آن است. بعد از سنترژن به صورت مصنوعی سپس پلاسمید حاوی ژن تولید کننده آنزیم DNA به سویه E. ColIBl21 انتقال یافت. از IPTG به عنوان القاء گر برای بیان ژن استفاده می شود فعال سازی آنزیم توسط امواج اولتراسوند و به وسیله شوک حرارتی در 720c و رسوب دهی پروتئین های نامحلول و به وسیله سانتریوفوژ انجام می گردد. DNATaq مقاوم به حرارت و حساس به سرما نوترکیب بیان شده در E. col برتری قابل توجه به عملکرد بهتری نسبت به آنزیم از نظر فعالیت و مقاوم در برابر حرارت است. ژن تولید کننده آنزیم به محیط کشت LB مایع حاوی آنتی بیوتیک به مدت 3 ساعت در دمای 370c جهت بهینه شدن پروتئین القاء کننده IPTG به محیط است به مدت 12 ساعت انکو به شده پس از القاء خالص سازی اولیه آنزیم توسط اولتراسوند و شکسته شدن دیواره سلول و شوک حرارتی در 720c است. لایه فوقانی توسط سانتریوفوژ جدا شده، از سوپرتانت به عنوان نمونه گیری استفاده می شود. برای تصفیه آنزیم به ستونی که فیلتر شده اضافه می شود. برای تنظیم PH با ضربه آن اضافه می شود. پس از خارج کردن بافر از ستون مدت 2 ساعت انکوبه می شود پروتئین ها جداسازی و خالص سازی روی ژل SDSPAGE الکتروفورز و وزن خالص مشخص می شود.
فهرست مطالب: مقدمه چکیده و هدف خالص سازی DNA از سلول های زنده تهیه کل DNA سلول دومین محیط کشت تهیه عصاره سلولی خالص سازی DNA از عصاره سلولی تغلیظ نمونه های DNA تهیه کل DNA سلول جداسازی براساس اندازه جداسازی براساس ساختار فضایی تهیه DNA باکتریوفاژ کشت باکتری ها برای تهیه مقادیر زیاد فاژ لامبدا خالص کردن DNA از ذرات فاژ لامبدا شکستن دیواره’ سلولی و یا لیز کردن سلولها جدا کردن مواد و DNA استفاده از نمکهای رسوب دهنده پروتئن نتیجه گیری
تعداد مشاهده:
540
مشاهده
فرمت فایل دانلودی:.rar
فرمت فایل اصلی: docx
تعداد صفحات: 19
حجم فایل:286
کیلوبایت
قیمت:
5,000 تومان
پس از پرداخت، لینک دانلود فایل برای شما نشان داده می شود.
پرداخت و دریافت فایل
راهنمای استفاده:
مناسب جهت استفاده دانشجویان رشته ژنتیک، زیست شناسی و پزشکی
محتوای فایل دانلودی:
در قالب فایل word و قابل ویرایش